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酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法類型詳解:直接法、間接法、夾心法與競爭法

更新時間:2025-08-18    點擊次數(shù):1757

  酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法類型詳解:直接法、間接法、夾心法與競爭法

  以下是酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)四種主要方法類型的詳解,本生技術(shù)小編綜合了高可信度來源的技術(shù)原理與比較分析:

  一、直接法ELISA‌

  原理‌:

  抗原直接包被于固相載體,加入酶標(biāo)記的一抗結(jié)合后顯色,信號強(qiáng)度與抗原濃度成正比‌。

  特點‌:

  | 優(yōu)點 | 缺點 |

  | 操作簡單(僅需一步孵育) | 靈敏度低(信號無放大) |

  | 無二抗干擾,特異性高 | 需標(biāo)記每種一抗,成本高 |

  適用場景‌:純化抗原或重組蛋白的快速檢測‌。

  二、間接法ELISA‌

  原理‌:

  抗原包被后,先與未標(biāo)記一抗結(jié)合,再通過酶標(biāo)二抗放大信號‌。

  特點‌:

  | 優(yōu)點 | 缺點 |

  | 信號強(qiáng)(二抗多價結(jié)合) | 可能因類風(fēng)濕因子等產(chǎn)生假陽性‌ |

  | 通用性強(qiáng)(同一二抗適配多種一抗) | 步驟較直接法多 |

  典型應(yīng)用‌:血清抗體篩查(如HIV抗體檢測)‌。

  三、雙抗體夾心法ELISA‌

  原理‌:

  使用兩種抗體分別作為捕獲抗體和檢測抗體,抗原被"夾"在中間形成復(fù)合物‌。

  關(guān)鍵要求‌:

  抗原需含至少兩個表位(大分子如細(xì)胞因子適用)

  兩種抗體需靶向不同表位以避免交叉反應(yīng)‌

  優(yōu)勢‌:

  靈敏度與特異性最高,適合復(fù)雜樣本(如血清中的細(xì)胞因子)‌。

  四、競爭法ELISA‌

  原理‌:

  樣本抗原與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合有限抗體,信號強(qiáng)度與樣本抗原濃度成反比‌。

  設(shè)計要點‌:

  適用于小分子

  需嚴(yán)格控制抗體親和力‌

  應(yīng)用示例‌:農(nóng)藥殘留檢測。

  方法選擇指南‌

  大分子抗原‌:優(yōu)先夾心法(需驗證抗體配對)‌

  小分子/半抗原‌:競爭法是選擇‌

  抗體檢測‌:間接法(高通量)或捕獲法(特殊需求)‌

  快速篩查‌:直接法(犧牲靈敏度換速度)‌

  注:所有方法均需通過標(biāo)準(zhǔn)曲線定量,并設(shè)置陰陽性對照‌。

  如需具體實驗操作演示,可參考以下視頻資源:

  注:以上資料僅供參考,具體請咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。

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